Contribución a la estandarización de un extracto citotóxico rico en flavonoides de flores de Kalanchoe pinnata (Lam) peerson

Abstract

La especie Kalanchoe pinnata es una especie de gran importancia medicinal, ampliamente utilizada en la medicina tradicional en Latinoamérica y el sur de África. A esta especie se le han reportado actividades, tales como: antioxidante, antiinflamatoria, antimicrobiana y citotóxica, entre otras. En donde algunas de esas actividades, como la actividad citotóxica, se han relacionado con su contenido de flavonoides de sus hojas. En estudios previos realizados por el laboratorio de Inmunobiología y Biología Celular de la Pontificia Universidad Javeriana, se ha observado que el extracto acuoso de flores tiene mayor actividad respecto al mismo extracto a partir de sus hojas, principalmente frente a la línea celular tumoral MCF-7 (cáncer de seno). Teniendo en cuenta lo anterior, se ha avanzado en su estudio químico, contribuyendo a la estandarización del extracto acuoso de sus flores, para el cual, se han determinado algunas variables fisicoquímicas del material vegetal, siguiendo los parámetros de estandarización establecidos por la Organización Mundial de la Salud (OMS) y por Farmacopeas. Se determinaron aspectos y parámetros como características macro y microscópicas, materia extraña, humedad, tamaño de partícula, cenizas totales y cenizas insolubles en ácido clorhídrico, encontrando valores dentro de los límites establecidos por las farmacopeas (Brasileña 5ª Ed y Estadounidense 31ª Ed). Se identificaron 13 flavonoides presentes en el extracto mediante los análisis por UHPLC-MS-QTOF y por UPLC-DAD, los cuales en su mayoría tuvieron núcleo quercetina y kaempferol, siendo el compuesto mayoritario la quercetina 3-O-α-L-arabinopiranosil (1→2) α-L-ramnopiranósido. El método por UPLC-DAD fue validado para la cuantificación de flavonoides totales, de manera alternativa a la cuantificación de flavonoides totales por UV-Vis, obteniendo una linealidad con coeficientes de correlación (R2) ≥ 0,99, precisión con desviaciones estándar relativas (DSR) < 5% y exactitud cercana al 100%. Con el método validado se cuantificaron las cantidades de flavonoides totales, obteniéndose un rango de 8 a 13%. Por otra parte, los resultados obtenidos en la separación por Cromatografía de Partición Centrifuga (CPC), con el sistema acetato de metilo-butanol-agua (AcOMet-BuOH-H2O) proporción 2,5:2,5:5, se obtuvo una purificación de los flavonoides quercetina 3-O-β-D-glucurónido y quercetina 3-O-α-L-arabinopiranosil (1→2) α-L-ramnopiranósido, con grados de pureza de 88,1 % y 84,2 %, en un único análisis de 30 minutos, a partir del extracto crudo. Finalmente, mediante las pruebas de estabilidad realizadas, se determinó que el extracto de K. pinnata es estable frente a condiciones de hidrólisis por reflujo en agua, muy lábil frente a condiciones de estrés ácido y básico y prácticamente estable en condiciones de estrés oxidativo. De igual forma se determinó que es un extracto estable en forma sólida y en solución acuosa, en condiciones de refrigeración a 4°C, presentando porcentajes de degradación por debajo de 12%.