Evaluación del papel de PD-L1 en la proliferación en una línea celular de melanoma murino

Abstract

El melanoma es el tipo de cáncer de piel más agresivo que existe y es una de las principales causas de muerte por cáncer a nivel mundial. Se ha demostrado que este tipo de cáncer tiene un alto infiltrado inmune y es por esto que se han desarrollado diferentes estrategias de inmunoterapia que tienen como objetivo la activacion de la respuesta inmune antitumoral. Entre las moléculas utilizadas para dichas estrategias se encuentran los puntos de chequeo inmune, como la proteína de muerte celular programada 1 (PD-1) y su ligando PD- L1, encargados de regular la respuesta inmune en especial la actividad de los linfocitos T. Además de la expresión en células del sistema inmune, se ha descrito la expresión de PD- L1 también en células tumorales. En melanoma, se ha evidenciado una alta expresión de PD-L1 y se ha asociado con un peor pronóstico de la enfermedad. Además, la expresión de PD-L1 en células tumorales se asocia con la generación de señales de supervivencia y proliferación que pueden promover la progresión del cáncer. Teniendo en cuenta la importancia que puede tener esta proteína en procesos tumorales, especialmente en la proliferación, el objetivo de este proyecto fue evaluar el efecto de PD-L1 en la proliferación de una línea celular de melanoma murino. Para llevar a cabo esta investigación se utilizó la línea celular B16-F10, y los clones knock-out de PD-L1 generados por el grupo de Inmunobiología y Biología Celular de la Pontificia Universidad Javeriana haciendo uso del sistema CRISPR/Cas9. Adicionalmente, como control se utilizó la línea celular B16-F10 Scramble, generada utilizando el mismo sistema. En estas líneas se determinó la expresión de PD-L1 a nivel de superficie e intracelular por citometría de flujo y se confirmaron los resultados de la expresión de PD-L1 por Western Blot. Posteriormente, se evaluó la proliferación de estas células a 24, 48 y 72 horas haciendo conteo con azul de tripano en cámara de Neubauer. Se logró confirmar la efectividad del sistema CRISPR/Cas9 y la ausencia de PD-L1 en los clones generados, asimismo se observó una tendencia a la disminución de la proliferación a las 48 y 72 horas de los clones generados en comparación con las células control. Esta tendencia sugiere que PD-L1 podría estar regulando procesos de proliferación en la célula tumoral, sin embargo, se requiere de un estudio más profundo para confirmar estos resultados.