Caracterización de clones lipolíticos provenientes de una biblioteca metagenómica de suelo de bosque altoandino colombiano

Abstract

Con el objetivo de caracterizar dos clones lipolíticos provenientes de una biblioteca metagenómica de suelo de Bosque Altoandino del Parque Nacional Natural Los Nevados, se evaluó reliminarmente la actividad lipolítica de los clones BAA3 y BAA4 sobre medio Luria Bertani (LB) suplementado con 1% (v/v) de Tributirina como sustrato. Después de incubación a 37ºC durante 4 días se observó el crecimiento de colonias. Adicionalmente se incubaron a 6ºC hasta la formación de halos de hidrólisis alrededor de estas, confirmando su actividad lipolítica e indicando que la enzima puede ser estable y activa a bajas temperaturas. Se determinó que la mayor concentración de plásmido para el clon BAA3 fue de 73,8 ng ?l-1 y para el clon BAA4 fue de 46,1 ng ?l-1 a la hora 9, final de la fase exponencial de crecimiento de cada uno de los clones. El tamaño promedio del inserto calculado para los dos clones fue de 4 Kb aproximadamente, y fue verificado por electroforesis en gel de agarosa al 1%. La actividad lipolítica de los clones y su preferencia por sustrato lipídico, fue caracterizada mediante el uso de p-nitrofenil esteres (pNP) con varias longitudes de cadena. Los resultados mostraron que la mayor actividad lipolítica (U) fue hacia p-nitrofenil Acetato (C2) con un pH óptimo de 8,0, y una actividad específica de 8,19 U mg-1 a 30ºC, y 8,99 U mg-1 a 50ºC para el clon BAA3 y BAA4 respectivamente.