Efecto de las células stem mesenquimales sobre la proliferación, inmunofenotipo y clonogenicidad de las células stem hematopoyéticas

Abstract

El trasplante de células stem hematopoyéticas(CSH) a partir de sangre de cordón umbilical (SCU) se ha convertido en la alternativa de tratamiento para distinto tipos de patologías en la actualidad. Pero el mayor obstáculo consiste en el número de células requeridas para garantizar la supervivencia del receptor. La universidad de Minnesota sugiere dosis precisas de 1,5X10 7 /Kg de células mononucleares totales (CMN) (Ballen k, et al.2001).Por tal razón la optimización de procesos de expansión in vitro de CSH que mantengan su número sin perder la capacidad de autorenovación se convirtió en el motivo principal a evaluar Se evaluó, con el sistema de co-cultivo, el efecto de las células stem mesenquimales (CSM) provenientes de MO los cambios sobre las CSH de SCU en la expresión de inmunofenotipo, proliferación y clonogenicidad en medios semi-solido. Estas células fueron puestas en distintas condiciones teniendo en cuenta la influencia del contacto celular directo, contacto celular más factores solubles y el semicontacto celular para algunos ensayos. Inicialmente se estableció una optimización en la obtención, cultivo, expansión y mantenimiento de CSM provenientes de donantes voluntarios que fueron sometidos a intervenciones quirúrgicas de cadera. Se realizaron también aislamientos, purificación y cultivo celular de CSH a partir de SCU de trabajo de parto o cesáreas para luego ser puestas en un sistema de co-cultivo celular con CSM. Se observaron cambios en los eventos proliferativos a los 3 y 7 días de las CSH que fueron puestas en la condición “A” (Hematopoyéticas , Mesenquimales y factores ) y “C” (Hematopoyéticas y factores), a diferencia de los cultivos en la condición “B” (Hematopoyéticas y Mesenquimales) que presentaron menos eventos proliferativos al evaluarse por CFSE. La expresión del Inmunofenotipo de las CSH presentó variaciones en CD33,CD38(p=0,003 y p=0,0271, respectivamente) a los 3 días pero no diferencias significativas a los 7 días(p=0,4648 y 0,0625, respectivamente). El antígeno CD34 no presenta variaciones ni a los 3 y 7 días (0,1353; p=0,0625). Otros antígenos como HLA-DR presentaron una expresión constante de antígenos en el tiempo, mientras que CD117 guardó diferencias estadísticamente significativas a los 7 días (p=0,0083). Para los ensayos de clonogenicidad se evaluaron las condiciones de co-cultivos A(HMF), B(HM) y C(HF), condiciones de semicontacto por medio de membrana transwell 5um y a partir de sobrenadantes de mesenquimales, mostrando diferencias significativas en los recuentos de Unidades formadoras de colonias granulocíticas, megacariocítica, eritrocítica, monocíticas, principalmente. Esto permitió observar que el contacto ente las MSC y las HSC tiene algún efecto en el mantenimiento de colonias primitivas en vitro.