Detección del ARN del virus de hepatitis E en muestras de suero de pacientes y cultivo de células TCD8+
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Data
2019-05Autor
Garmendia-Lemus, Rodolfo
Quintero-Plascencia, Alan A.
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El virus de la Hepatitis E (VHE) se ha catalogado como la causa más común de hepatitis aguda en el mundo, teniendo presencia principalmente en países en vías de desarrollo (1). México se considera una zona hiper-endémica a dicha infección, y la información existente sobre su epidemiología molecular es limitada. El genoma del VHE contiene tres marcos abiertos de lectura ORF (Open Reading Frame, por sus siglas en ingles), siendo un ORF una secuencia de ARN que codifica para la síntesis de una proteína (2). Existe una región del genoma en donde el ORF2 y el 3 se superponen. Esta superposición ha resultado la más conservada entre los diferentes genotipos, lo que la hace una excelente opción para la detección de ARN viral a través de PCR utilizando oligonucleótidos específicos. En la presente investigación se realizó la extracción de ARN viral a partir de muestras de sangre de pacientes IgG e IgM anti–VHE positivos, se amplificaron las regiones mediante PCR utilizando oligonucleótidos específicos para el ORF2/3, y se detectó la presencia de esta fracción genómica por electroforesis. Se analizaron 8 muestras de pacientes, encontrando presencia del VHE en 5 de ellas, validando la metodología propuesta. Se realizó el cultivo celular de PMBC’s, posterior estimulación con anticuerpos anti-HEV para la expansión de una población celular de linfocitos TCD8+ y marcaje con fluorocromo Alexa Fluor 488 Antihuman CD8 para detección en citómetro de flujo. Se purificó la población celular y se obtuvo un porcentaje de purificación del 92%, lo que permitirá trabajar con estas células en futuras investigacionesITESO, A.C.