Las bacterias psicrotróficas son un desafío común en la industria láctea debido a que, su presencia se ve favorecida por el uso extendido de refrigeración como método de conservación. Estas producen enzimas termorresistentes, lipasas y proteasas responsables del deterioro del producto final. El objetivo de este estudio fue analizar la capacidad, in vitro, de formación de biopelículas de bacterias psicrotróficas aisladas de leche cruda, pasteurizada y procesada por ultra alta temperatura (UHT). Se determinó, espectrofotométricamente, la capacidad formadora de biopelículas de quince cepas de bacterias psicrotróficas, luego de ser incubadas por 10 días a 7°C. Seguido, se evaluó la respuesta frente a la exposición a ozono (O3 230ppm) como agente inhibidor. La metodología utilizada fue similar a la anterior mencionada, con una única variación que incluyó la adición de O3. Además, se determinó la capacidad de formación de biopelículas en placas de acero inoxidable sumergidas en leche descremada. A partir de esto, se realizó un recuento de células planctónicas presentes en leche y células recuperadas de biopelículas desarrolladas en placas de acero. También, se evaluó la resistencia al calor de células planctónicas y células recuperadas de biopelículas. Los resultados, indicaron que ocho cepas fueron clasificadas como formadoras de biopelículas en placas de poliestireno. Entre estas Pseudomonas brenneri C10.34 presentó la mayor DO492nm (0.777), mientras que Pseudomonas grupo fragi C6.28 exhibió el menor valor (0.225). En contraste, el tratamiento con ozono, indicó que cinco cepas mantuvieron la capacidad de formar biopelículas, aunque únicamente Pseudomonas brenneri C10.34 (DO492nm 0.396) y Pseudomonas grupo fragi E11.31 (DO492nm 0.242) mostraron una reducción estadísticamente significativa. Adicionalmente, se encontró que, todas las cepas se propagaron de manera óptima en leche descremada, alcanzando una población de células planctónicas mayor a 107 UFC/mL. Asimismo, todas las cepas fueron capaces de formar biopelículas en placas de acero inoxidable con concentraciones superiores a 105 UFC/cm2. Por otra parte, la supervivencia de células planctónicas o de biopelículas fue variable entre las cepas, independientemente de la forma de vida en la que se desarrollen. Este estudio demuestra la variabilidad en la capacidad de formación de biopelículas de las distintas cepas y sugiere al ozono como un agente inhibidor.