Síntesis y evaluación histológica de constructos tridimensionales que promueven la interacción de células mesenquimales con ectodermo oral embrionario de ratas Lewis para la obtención de tejidos semejantes a dientes

Abstract

Con el propósito de lograr la formación de una estructura similar a un diente, se estratificaron células de ectodermo oral embrionario con células troncales de medula ósea (CTMO) dentro de una matriz de hidrogel sintético (PEGDA) que se implantó en mesenterio de machos adultos de ratas Lewis. Mediante hibridización in situ de bloque completo, se evaluó la expresión de tres genes iniciadores putativos de la formación dental (Pitx2, Shh y Wnt10a), con lo cual se estableció que en ratas las señales iniciadoras de odontogénesis aparecen entre E12.5 y E13. El tejido ectodérmico embrionario se obtuvo por medio de cruces controlados de hembras a las que se les detectó el estro mediante impedanciometría. En E12.5 las hembras se sacrificaron y se extrajeron los embriones. Se disecó la porción mandibular del primer arco branquial bajo estereomicroscopio y el ectodermo se separó del mesénquima mediante disociación enzimática con una solución de tripsina y pancreatina. Las CTMO se extrajeron de los huesos largos de las extremidades posteriores de ratas mediante lavado con ?-MEM y se cultivaron en cajas de 25 cm2 hasta un segundo pasaje. Las CTMO fueron recombinadas con ectodermo embrionario competente (E12.5-E13) estratificándolas en un soporte tridimensional de PEGDA polimerizado con luz ultravioleta (365 nm) dentro de un molde piramidal de polipropileno (PP). Los constructos se cultivaron entre 48 y 72 horas en DMEM y posteriormente fueron implantados en el mesenterio de machos adultos (3 a 6 meses de edad) por un período de cuatro a seis semanas.