Aislamiento y caracterización de células “stem” mesenquimales de médula ósea humana según criterios de la Sociedad Internacional de Terapia Celular

Rodríguez-Pardo, Viviana Marcela; Grupo de Inmunobiología y Biología Celular. Departamento de Microbiología, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C.; Fuentes-Lacouture, María Fernanda; Laboratorio de Hematología. Grupo de Inmunobiología y Biología Celular. Departamento de Microbiología. Facultad de Ciencias. Pontificia Universidad Javeriana. Bogotá, D.C.; Aristizabal-Castellanos, José Alejandro; Laboratorio de Hematología. Grupo de Inmunobiología y Biología Celular. Departamento de Microbiología. Facultad de Ciencias. Pontificia Universidad Javeriana. Bogotá, D.C.; Vernot Hernandez, Jean Paul; Grupo de Fisiología Celular y Molecular. Departamento de Fisiología. Facultad de Medicina. Universidad Nacional de Colombia. Bogotá, D.C.

Isolamento e caracterização de células-tronco mesenquimais de medula óssea humana de acordo com critérios da Sociedade Internacional de Terapia Celular.

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Autor

Rodríguez-Pardo, Viviana Marcela; Grupo de Inmunobiología y Biología Celular. Departamento de Microbiología, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C.

Fuentes-Lacouture, María Fernanda; Laboratorio de Hematología. Grupo de Inmunobiología y Biología Celular. Departamento de Microbiología. Facultad de Ciencias. Pontificia Universidad Javeriana. Bogotá, D.C.

Aristizabal-Castellanos, José Alejandro; Laboratorio de Hematología. Grupo de Inmunobiología y Biología Celular. Departamento de Microbiología. Facultad de Ciencias. Pontificia Universidad Javeriana. Bogotá, D.C.

Vernot Hernandez, Jean Paul; Grupo de Fisiología Celular y Molecular. Departamento de Fisiología. Facultad de Medicina. Universidad Nacional de Colombia. Bogotá, D.C.

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URI

https://hdl.handle.net/20.500.12032/105442

Descrição

A medula óssea (MO) é uma importante fonte para o isolamento de células-tronco mesenquimais (CTM) úteis na terapia de regeneração dos tecidos e imunomodulação. Objetivo. Isolar e caracterizar células-tronco mesenquimais obtidas de MO de acordo com os critérios exigidos pela Sociedade Internacional de Terapia Celular. Materiais e métodos. Foram coletadas amostras de MO de doadores voluntários que assistiram ao Serviço de Ortopedia do Hospital Universitário de São Ignacio, Bogotá (Colômbia). As características morfológicas foram avaliadas por microscopia invertida, e o imunofenótipo foi determinado por citometria de fluxo. Foram estabelecidos protocolos de indução adipogênica, osteogênica e condrogênica usando meios de cultura específicos e a diferenciação foi avaliada por meio da coloração com o “Oil Red O”, fosfatase alcalina e safranina, respectivamente. Resultados. Foram coletadas 24 amostras de MO em pacientes submetidos à artroplastia total do quadril (volume de amostra de OM: 5 - 45 ml). Foram isoladas células com morfologia fibroblastóide a partir de 21 amostras de MO (eficiência de isolamento: 87,5%). Na determinação immunofenotípica (CTM de MO), não existe diferença estatisticamente significativa entre os antigénios hematopoiéticos (CD34 e CD45, p>0,05). Entre o antigénio hematopoiético CD45 e os antigénios mesenquimais (CD13, CD44, CD73, CD90, CD105, HLA-I e HLA-DR), existe diferença estatisticamente significativa (p =0,006). A coloração com o “Oil Red O” revelou a presença de adipócitos multiloculares, na indução osteogénica observaram-se centros de mineralização e a condrogênese foi positiva para a coloração com safranina. Conclusão. A partir de MO foram isoladas satisfatoriamente e caracterizaram CTM segundo os critérios internacionais exigidos. Palavras-chave: Células-tronco mesenquimais (CTM), citometria de fluxo, medula óssea, diferenciação celular.
La médula ósea (MO) es una fuente importante para el aislamiento de células “stem” mesenquimales (CSM) útiles en terapias de regeneración tisular e inmunomodulación. Objetivo. Aislar y caracterizar células “stem” mesenquimales obtenidas de MO según los criterios exigidos por la Sociedad Internacional de Terapia Celular. Materiales y métodos. Se recolectaron muestras de MO de donantes voluntarios que asistían al Servicio de Ortopedia del Hospital Universitario San Ignacio, Bogotá (Colombia). Se evaluaron las características morfológicas por microscopia invertida y se determinó el inmunofenotipo por citometría de flujo. Se establecieron protocolos de inducción adipogénica, osteogénica y condrogénica mediante el uso de medios de cultivo de específicos y se evaluó la diferenciación utilizando tinciones de aceite rojo ‘O’, fosfatasa alcalina y safranina, respectivamente. Resultados. Se recolectaron 24 muestras de MO de pacientes sometidos a reemplazo total de cadera (volumen de muestra de MO: 5 - 45 ml). Se aislaron células con morfología fibroblastoide a partir de 21 muestras de MO (eficiencia de aislamiento: 87,5 %). En la determinación inmunofenotípica (MSC de MO) no existe diferencia estadísticamente significativa entre los antígenos hematopoyéticos (CD34 y CD45, p>0,05). Entre el antígeno hematopoyético CD45 y los antígenos mesenquimales (CD13, CD44, CD73, CD90, CD105, HLA-I y HLA-DR) existe diferencia estadísticamente significativa (p=0.006). La tinción de aceite rojo ‘O’ reveló la presencia de adipocitos multiloculares, en la inducción osteogénica se observaron centros de mineralización y la condrogénesis fue positiva para la coloración con safranina. Conclusión. A partir de MO se aislaron satisfactoriamente y caracterizaron CSM según los criterios internacionales exigidos.Palabras clave: células “stem”, células mesenquimales, citometría de flujo, medula ósea, diferenciación celular

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