Análisis del perfil protéico de vesículas de membrana producidas durante la infección por rotavirus de células epiteliales intestinales a partir de geles en 2d.

Abstract

Antecedentes: Rotavirus (RV) es el agente causal de la gastroenteritis en niños, siendo también el más frecuente en enfermedades diarreicas agudas. Por otro lado, se ha visto que la protección frente a este virus no es del todo protectora. Se ha postulado que esto se puede asociar con la inducción de la liberación de vesículas de membrana (VM) con propiedades inmunomoduladoras durante la infección por RV de células epiteliales intestinales (CEI). Se esta haciendo la caracterización proteomica de estas vesículas para poder identificar posibles moléculas inmunomoduladoras asociadas con estas vesículas. Como parte inicial de esta caracterización acá se presenta el análisis comparativo usando geles en 2D de las proteínas de VM de las células infectadas con RV vs las células no infectadas (control Mock). Métodos: Las VM se prepararon a partir de los sobrenadantes de cultivo de las células Caco-2, usadas como modelo de CEI, infectadas o no con RV. Las VM se resolvieron en geles en 2D, y las proteínas teñidas con plata se analizaron usando el software Platinum 6.0 de Amersham para la identificación de los -spots- (proteínas). Resultados: se analizaron 4 geles provenientes del control mock, 3 geles provenientes de RV y 2 geles provenientes de preparaciones de virus purificado (TLPs). En los análisis intraclase se observó un porcentaje de similitud superior al 60%. Por otro lado, se hizo una comparación entre clases para determinar los -spots- compartidos entre Mock-RV y RV-TLPs, así como los -spots- presentes en los geles RV que no estuvieran ni en los geles Mock ni en los TLPs. Conclusiones: Por medio de este análisis comparativo se realizo la identificación de 20 -spots- potenciales de ser identificados por técnicas complementarias como la espectrometría de masas y la secuenciación.