Estandarización de la extracción de ADN y la amplificación y visualización de cuatro marcadores moleculares (ADNmt (ATP8, 16S, NADH-5) y ADNnu (AMY)) para estudios genéticos de felinos neotropicales (Leopardus spp. y Herpailurus yagouaroundi)

Abstract

Se estandarizaron los protocolos para la extracción de ADN y para la amplificación y electroforesis de los marcadores mitocondriales (ADNmt: ATP8, 16S, NADH-5) y nuclear (ADNnu: AMY) para felinos neotropicales (Leopardus spp. y Herpailurus yagouaroundi). Se utilizaron 94 muestras y 38 extraídos preparados previamente con correspondencia geográfica desde Nicaragua hasta Argentina. Se validaron los métodos de extracción orgánica Fenol-Cloroformo, inorgánica Chelex-100 y con Kit. Se encontró Fenol-cloroformo produjo extraídos de ADN de buena calidad y concentración, los cuales también amplificaron adecuadamente. Por otra parte, se estandarizaron las condiciones de PCR para 16S, la concentración tanto de ADN como de bromuro de etidio para la visualización y se validaron condiciones de PCR previamente reportadas para amplificar ATP8, NADH-5 y AMY. Se obtuvo 53 amplificados de los marcadores mitocondriales para 6 especies de Leopardus (L. colocolo, L. jacobita y L. geoffroyi., L. pardalis, L. tigrinus y L. wiedii) y dos de AMY, en los que se pudo determinar el sexo de individuos de L. pardalis y L. geoffroyi en gel de agarosa sin necesidad de recurrir a los de poliacrilamida.