Evaluación de la respuesta del TGF-beta y los linfocitos t residentes de memoria intestinales y esplénicos durante la infección por rotavirus en un modelo múrido

Abstract

El rotavirus (RV) es uno de los principales agentes causales de gastroenteritis aguda infantil. Para el año 2015 la infección por rotavirus generó el 29.3% de todas las muertes por diarrea en niños menores de 5 años. Las características de la respuesta inmune protectora inducida contra el rotavirus no se conocen en detalle. Existe desconocimiento de dos componentes inmunológicos importantes: el papel del Factor de crecimiento transformante β (TGFβ) y el de los linfocitos T residentes de memoria (LTrm). En el presente trabajo se evaluaron estos dos componentes durante la infección por rotavirus en ratones. Para cumplir nuestro primer objetivo, ratones C57BL/6 neonatos fueron inoculados con mock (control negativo) o con rotavirus homólogo (RV-EC) o heterólogo (RRV). A los días 2, 4, 6, 8 y 12 post-infección (PI) se evaluaron los niveles de mRNA del gen TGFβ en bazo e intestino delgado y los niveles de proteína de TGFβ1 en el contenido intestinal y el suero. Los resultados sugieren que los ratones neonatos infectados con RRV y RV-EC presentan cambios en la expresión del mRNA de tgfb1 y/o de la proteína TGFβ1 a nivel sistémico e intestinal a diferentes días PI. Nuestro segundo objetivo buscó evaluar la frecuencia y el fenotipo de los linfocitos T residentes de memoria intestinales (LTrmi) y esplénicos, totales y específicos de RV, en ratones infectados con el RRV. Inicialmente, se usaron ratones C57BL/6 adultos para estandarizar el aislamiento y tinción de LTrm de bazo e intestino delgado. Posteriormente, ratones C57BL/6 adultos fueron inoculados con 10_7 UFF de RRV o mock. A los 7 días post-infección (DPI) se realizó una tinción intravascular (IV) usando un anticuerpo anti-CD45.2 (marcador presente en todos los leucocitos), se practicó eutanasia y se extrajo una muestra de sangre, el bazo y el intestino delgado. Las células extraídas de estos órganos se tiñeron con marcadores de superficie y tetrámeros específicos de rotavirus y se analizaron por citometría espectral. Así, se describió el fenotipo y la frecuencia de los LTrm (totales y específicos de RRV) y se analizaron los marcadores de importancia para el desarrollo, regulación y mantenimiento de este subconjunto de linfocitos T (LT) en ratones adultos control (bazo, linfocitos de lámina propia (LPL) y linfocitos intraepiteliales (IEL) de intestino delgado) e infectados con RRV (bazo).Se identificó que al día 7 PI los LT IV (CD45.2+) circulantes aislados de bazo CD8+ específicos de RV fueron probablemente activados en intestino y presentan principalmente un fenotipo de LT efectores de corta vida (SLEC), a diferencia de los LT no IV (CD45.2-) residentes con una mayor diferenciación hacía LT precursores de memoria (MPEC). Nuestro siguiente objetivo, contemplado en un nuevo proyecto en curso, es evaluar el papel del TGF-Beta en la generación de los LTrmi.