Expresión de Lignino peroxidasa en Pichia pastoris X-33 bajo el control del promotor constitutivo GAP

Abstract

Las problemáticas actuales relacionadas con el vertimiento de sustancias tóxicas a diferentes cuerpos de agua generan gran preocupación, ya que representa un riesgo para los ecosistemas y las especies que los habitan, lo que conlleva a la necesidad de generar alternativas que permitan desarrollar un proceso de biorremediación sin provocar efectos adversos, como el uso de tratamientos biológicos basados en el uso de microorganismos productores de enzimas capaces de degradar diferentes compuestos, con lo que sería posible reducir los niveles de contaminación. Es por esto que, en este estudio se realizó la expresión de lignino peroxidasa (E.C. 1.11.1.14) recombinante en Pichia pastoris, bajo el control del promotor constitutivo GAP (gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa). Para esto se optimizaron diferentes parámetros gen codificante determinantes para la expresión de esta enzima, integrándolo inicialmente en E. coli con el vector de replicación pUC57 con el fin de aumentar la concentración del material genético, para después realizar un constructo con el plásmido pGAGαA, nuevamente insertándolo en el genoma esta bacteria, una vez que se obtuviera la mayor cantidad posible de dicho material genético se esperaba realizar una electroporación con Pichia pastoris, con lo que finalmente se llevaría a cabo una cinética de crecimiento y una evaluación la actividad enzimática, así como la determinación otros parámetros fundamentales. Adicionalmente, se realizó una revisión de literatura con respecto a la producción de diferentes proteínas heterólogas en sistemas inducibles y constitutivos especialmente empleando pAOX1 y pGAP , a partir de lo cual, es posible concluir que el uso de este último implica mayores beneficios, así como más facilidades en su uso, puesto que al no necesitar de una sustancia inductora y realizar la trascripción de manera constante, es posible obtener mejores resultados con respecto a la producción y eficiencia de estas.