Description
El desarrollo de una prueba de flujo para la detección del virus del papiloma humano busca reducir el riesgo de cáncer cervicouterino en los portadores del virus. Es por ello que se debe de aislar, expresar y purificar la proteína de interés para que esta prueba cumpla su objetivo. Por lo tanto, en esta investigación se trabajó con cepas de E.coli: top10 y BL21 y con tres distintos vectores: pUC57, pET28 y pET32. El crecimiento de estas dos cepas de interés se llevó a cabo en dos medios: LB y YENB, según la finalidad del proceso. Al estar trabajando con dos plásmidos de expresión diSTINTOS, fue necesario trabar con dos tipos de antibióticos: kanamicina y ampicilina con el fin de evitar el crecimiento de cualquier otro microorganismo. Como técnicas para preparación y transformación de células competentes se empleó un método químico (quimio competentes) y otro físico (Electroporación). La expresión de la proteína recombinante se llevó a cabo en el plásmido pET28, ya que este no presenta una etiqueta de tiorredoxina dentro de su secuencia y permite la obtención de una proteína similar a la proteína nativa. Se realizó una cinética con distintas concentraciones de inductor no metabolizable (IPTG) y tiempos, para poder determinar las mejores condiciones de expresión de la proteína viral. Finalmente, se demostró que la proteína viral presenta una mayor expresión con condiciones de 0.5mM IPTG y dos horas como periodo de incubación; esto evidenció el potencial que se puede obtener al variar el inductor IPTG.
