Análisis de la glicoproteina B de los Alphaherpesvirus bovinos 1 y 5 como candidata vacunal contra la rinotraqueitis infecciosa bovina

Abstract

Los virus del herpes bovino (BoHV 1 y BoHV-5) son los agentes causantes de la Rinotraqueitis Bovina Infecciosa (IBR) y la Meningoencefalitis Bovina. Ambas enfermedades son responsables de importantes pérdidas económicas en la industria ganadera. Diferentes autores han reportado que la vacunación para mejorar la inmunidad es el medio más directo y efectivo para prevenir estas enfermedades. En estos últimos años varios grupos de investigación se han centrado en las glicoproteínas de envoltura como candidatos vacunales potenciales, en muchos casos obteniendo resultados que apoyan a estas moléculas como blancos de la vacunación. La glicoproteína B (gB) de la envoltura es esencial en los primeros pasos de infección por BoHV a las células epiteliales del tracto respiratorio superior y genital de los bovinos. Esta glicoproteína es uno de los principales antígenos candidatos para una potencial vacuna recombinante ya que podría inducir una respuesta inmune humoral neutralizante evitando la adhesión y posteriores etapas del ciclo de los virus. Para iniciar el estudio se evaluó la prevalencia viral en ganado del departamento de Sucre encontrando una seroprevalencia del 91,66% (55/60) en los animales muestreados. Más adelante se seleccionó́ la gB del BoHV-1 y BoHV-5 y se caracterizó en términos de función, estructura y antigenicidad a través de herramientas bioinformáticas mostrando secuencias y estructuras conservadas. Con estos resultados se seleccionaron los dominios denominados PH Like 1 del BoHV-1 y PH Like 2 del BoHV-5 para el diseño de un candidato vacunal bivalente. El estudio inmunoinformático de esta quimera candidata mostró que estos dos dominios tienen epítopos conformacionales y lineales reconocibles por los linfocitos B y también poseen epítopos para linfocitos T. A continuación, el ADN codificante para estos dominios se insertó en el plásmido pPICZAlphaA y se transformó la levadura Komagataella phaffii GS115 con la secuencia del candidato vacunal DgB, se testeo la producción especifica mediante Dot Blot para posteriormente purificar por cromatografía de afinidad y cuantificar por BCA el producto obtenido, por medio de un Western Blot se corroboró la purificación de una proteína recombinante con un peso molecular de aproximadamente 110 kDa a partir de la purificación medio de cultivo. Con este producto se inocularon cada 15 días ratones con DgB adyuvada con Montanide 50 ISA V2 o hidróxido de aluminio. Al primer grupo se le administró por vía intramuscular DgB + Montanide 50 ISA V2, el segundo grupo recibió por vía intramuscular DgB + Hidróxido de aluminio, el tercer grupo se inoculó por vía subcutánea con DgB + Montanide 50 ISA V2 y al cuarto grupo se le administró por vía subcutánea DgB + Hidróxido de aluminio. Un grupo de control se inoculó con PBS y otro grupo recibió una vacuna comercial, ambos fueron inoculados por vía subcutánea. Se obtuvieron sueros de los ratones y se realizaron pruebas de seroneutralización viral contra BoHV-1, BoHV-5 y una cepa recombinante natural de BoHV. Dentro de los resultados obtenidos se tiene una proteína candidata a vacuna (DgB) que fue reconocida por un anticuerpo monoclonal de un kit ELISA comercial utilizado para el diagnóstico de IBR, lo que puede sugerir que los epítopos se conservan de todo el virus infeccioso. En la seroneutralización viral se obtuvieron títulos más altos de anticuerpos neutralizantes contra BoHV-1, BoHV-5 y una cepa recombinante natural de BoHV con la formulación de vacuna candidata a base de aceite (Montanide ISA 50 V2) administrada por vía intramuscular. Se demostró que los dominios recombinantes de BoHV-1/5 gB tienen propiedades antigénicas e inmunogénicas similares a las de la gB nativa. Los resultados demostraron que la DgB quimérica conservó epítopos importantes que pudieron estimular la respuesta inmune humoral capaz de neutralizar el BoHV-1, el BoHV-5 y la cepa recombinante, lo que sugiere que es un candidato prometedor como antígeno vacunal en una futura y posible vacuna.