Detección de células secretoras de anticuerpos totales y específicas de rotavirus en adultos sanos

Abstract

Ya que los anticuerpos (Ac) son uno de los principales mecanismos de defensa contra la infección por rotavirus (RV), la capacidad de identificar a las células que secretan anticuerpos (CSA) totales y RV específicos es fundamental para procesos como el análisis de la respuesta inmune antiviral y la evaluación de nuevas vacunas. Aquí, se analiza por ELISPOT (ensayo funcional) y citometría de flujo (CF {ensayo fenotípico)) la frecuencia e isotipo de CSA totales y RV específicas en adultos sanos, usando células mononucleares de sangre periférica totales (CMSP) y a las moléculas CD38 y CD27 como marcadores para enriquecer en CSA. Por cada millón de CMSP, aproximadamente 2,550 células producían Ac totales. La IgA fue el isotipo más frecuente, seguido de la IgG e IgM, con el 63%, 29.4% y 7.6% respectivamente. El análisis combinado del ELISPOT y la CF mostró que el 85% de las CSA expresaron CD38 y el 90% de ellas expresaron CD27. Una alta y significativa correlación entre las CSA detectadas por el ensayo funcional y el fenotípico fue encontrada cuando estos ensayos se realizaron en las poblaciones purificadas con CD38 y CD27. Con el enriquecimiento de CSA usando al CD38 y CD27, se logró además detectar CSA RV específicas que se encuentran en circulación en tan baja frecuencia como 0 a 40 CSA-RV por millón de CMSP. Para las células RV-específicas, también una buena correlación fue encontrada entre el ELISPOT y la CF. A pesar de su muy baja frecuencia, CSA antígeno específicas pueden ser detectadas en circulación de voluntarios sanos. Este acercamiento puede ser usado en la evaluación de vacunas, que para el caso particular del RV son necesarias mejorar.