Utilidad de la Electroforesis en Gel de Campo Pulsado (PFGE) para la tipificación molecular de Listeria monocytogenes

Abstract

El objetivo principal de este trabajo fue determinar mediante una revisión bibliográfica si la Electroforesis en Gel de Campo Pulsado (PFGE) es la herramienta molecular más adecuada para la tipificación y diferenciación de aislamientos de Listeria monocytogenes. Para cumplir este objetivo se seleccionaron 70 artículos científicos, los cuales fueron organizados y tabulados por año de publicación, desde 1992 hasta el 2012, lo que permitió obtener información como, el tipo de PFGE y las enzimas de restricción utilizadas, el protocolo empleado y la metodología de análisis de los patrones de bandeo. Se encontró que la PFGE permite la separación de moléculas de ADN de alto peso molecular (hasta 10Mpb) a través del uso de enzimas de restricción que cortan el ADN de L. monocytogenes con una baja frecuencia, generando patrones de restricción simples (10-20 bandas) lo que simplifica el análisis, el cual se realiza a través de un software que permite la comparación rápida y fácil de los aislamientos. La PFGE ha demostrado tener mayor poder discriminativo que la mayoría de técnicas moleculares utilizadas para la tipificación de L. monocytogenes. En el protocolo de PFGE estandarizado (variante CHEF) para la subtipificación de L. monocytogenes se requiere la combinación de las enzimas de restricción ApaI y AscI, lo que permite reducir el tiempo de la corrida a 30h. Mediante el análisis y agrupación de los datos obtenidos en PFGE ha sido posible la agrupación de los aislamientos de L. monocytogenes en 3 linajes genéticos. La nomenclatura de los linajes varía entre investigadores, sin embargo, por lo general se sabe que en el linaje I están incluidos los serotipos 1?2b, 3b, 4b, 4d, 4e y 7, en el linaje II los serotipos 1?2a, 3a, 1?2c y 3c y en el linaje III, los serotipos 4a y 4c, así como algunas cepas del serotipo 4b. Sin embargo, se ha reportado la existencia de un linaje IV el cual fue identificado por primera vez mediante la técnica MLGT (Multilocus genotyping) y se compone de los serotipos 4a, 4b y 4c, los cuales difieren considerablemente de los miembros del linaje III. Ninguno de los artículos científicos revisados menciona la agrupación de cepas del linaje IV a través de la PFGE, lo que sugiere que esta técnica, podría no ser la que mejor para discriminar entre los linajes III y IV.