Estudio fitoquímico de extractos polares de hojas de Ilex guayusa Loes y evaluación preliminar antiviral HSV-1

Abstract

La utilización tradicional de especies vegetales aliada al desarrollo científico viene propiciando grandes avances en el empleo terapéutico de plantas medicinales. Ilex guayusa Loes. es una planta doméstica con un amplio uso histórico, con distribución en el amazonas colombiano, ecuatoriano y peruano. En la medicina tradicional, es utilizada para en el tratamiento de infecciones bacterianas y en la preparación de lavados bucales. En la literatura, son pocos los estudios químicos y farmacológicos para esta especie, destacándose la presencia de cafeína. El objetivo de este trabajo fue caracterizar el perfil químico de extractos polares de hojas de Ilex guayusa Loes. Para esto, se buscó analizar la composición de diferentes extractos mediante técnicas cromatográficas y electroforéticas. En consecuencia, se elaboraron diferentes extractos a partir de hojas de I. guayusa, simulando preparaciones de uso tradicional: extractos acuosos e hidroalcohólicos. Estos fueron analizados mediante diversas técnicas analíticas, como TLC, HPTLC, UPLC-DAD, UPLC-MS-QTOF y CE-DAD. Por TLC y HPTLC se pudo determinar los perfiles cromatográficos de diferentes clases de metabolitos para los extractos, en donde se observó la presencia de cafeína en todos los extractos, además de diversos ácidos fenólicos y saponinas. Los análisis por UPLC-DAD y UPLC-MS-QTOF corroboraron la presencia de cafeína como compuesto mayoritario, además de permitir la identificación de los ácidos cafeico y clorogénico. También se observó la presencia de múltiples polifenoles, algunos derivados de ácido quínico (con fragmentos en m/z 191), además de isómeros del ácido clorogénico (m/z 353). Adicionalmente, se detectaron picos cuyas masas son coherentes con saponinas (m/z 809 , 989 y 1019), de las cuales presencia fue previamente observada por HPTLC. El contenido de cafeína en los diferentes extractos fue cuantificado por dos técnicas, UPLC-DAD y CE-DAD, desarrollando y validando los métodos, a partir de un estándar externo. Se obtuvo que el extracto con mayor concentración de cafeína fue el obtenido por maceración con 20% etanol 72 horas, con un contenido de 86,41-89,80 mg/g de extracto. El contenido total de cafeína en hojas para la planta fue de 187,86 mg/g de extracto. En un análisis comparativo con diferentes bebidas comerciales por estas mismas técnicas, el contenido de cafeína en I. guayusa por volumen de bebida fue superior a bebidas como el café, mate, chimarrão y té. Adicionalmente a los análisis fitoquímicos, en el presente trabajo también se evaluó la actividad antiviral de los extractos frente a Herpes Simplex Virus tipo 1(HSV-1), cepas KOS y 29-R en ensayos de reducción de placas. Los resultados mostraron que el extracto por maceración 20% etanol 72 horas fue el más activo para ambas cepas (IC50=128,7µg/mL y 91,08µg/mL, respectivamente). Sin embargo, se destaca también el extracto obtenido por infusión acuosa (1:10), por ser el que mostró un mejor índice de selectividad frente a la cepa 29-R, con un valor de IS=29,9. Los resultados obtenidos en este trabajo de grado muestran la compleja composición química de I. guayusa, destacando su elevado contenido de cafeína y la presencia de saponinas, no descritas hasta el momento en la literatura para la especie, así como, los resultados preliminares que indican una interesante actividad antiviral frente a HSV-1.