Estandarización de una PCR para la identificación molecular de Listeria innocua

Abstract

En este trabajo de grado se estandarizó la técnica de PCR para la identificación de L. innocua sin interferencia con L. monocytogenes. Para la extracción de ADN de los microorganismos utilizados en este trabajo y de los 110 aislamientos diferentes provenientes del proyecto Diseño de un plan integral para reducir la prevalencia de Salmonella spp., y |L. monocytogenes en plantas de beneficio, desposte y puntos de venta en la cadena cárnica porcina se utilizó el kit de extracción de ADN PROMEGA (A1125). La PCR para la identificación de L. monocytogenes se basó en la especificidad de los primers LI1/U1 que amplificaron una banda de 938pb para la identificación de género y los primers LF/LR que amplificaron una banda de 750pb para la identificación de la especie. La PCR para la identificación de L. innocua se basó en los primers lin0464F/lin0464R que amplificaron una banda de 749pb. Los resultados de la estandarización de la PCR para identificación de L. innocua mostraron una alta especificidad de los primers (100%) valorando las cepas interferentes que fueron empleadas en este estudio, y un límite de detección de la PCR de (70fg/?L), los aislamientos pertenecientes al proyecto de investigación, permitieron calcular la proporción de L. innocua de 56.4%. Este trabajo de grado muestra que la técnica de PCR estandarizada, sirve para detectar la presencia de L. innocua y discriminar esta especie de L. monocytogenes.