| dc.description.abstract | Las β-hexosaminidasas (EC 3.2.1.52) son enzimas lisosomales que juegan un papel importante en el
catabolismo lisosomal de los glicoesfingolípidos. Los defectos en sus vías de degradación están
asociados con enfermedades neurodegenerativas que incluyen la enfermedad de Tay-Sachs y
Sandhoff. Actualmente, estos trastornos son incurables, razón por la cual se han adelantado estudios
en una terapia de reemplazo enzimático. La levadura metilotrófica Pichia pastoris ha despertado un
interés cada vez mayor para la producción de proteínas recombinantes, ya que se ha reportado
ampliamente este microorganismo como un sistema de expresión eucariota eficiente, debido a la
disponibilidad de promotores fuertes como el alcohol deshidrogenasa 1 (AOX1). Sin embargo, uno de
los principales inconvenientes que actualmente se presenta con el uso de este promotor, radica en
la legislación Colombiana, en la cual, según el artículo 4º del Decreto 2272 de 1991, se encuentra
vigente la limitación a la importación de metanol. Por esta razón, en los últimos años se han hecho
esfuerzos importantes para reducir el uso de metanol y desarrollar promotores alternativos, como el
promotor GAP, un promotor constitutivo fuerte, en el cual el gen foráneo se expresa asociado con el
crecimiento celular. Con base en lo anterior, el objetivo de este estudio consiste en evaluar la
expresión de la enzima β-Hexosaminidasa humana Recombinante en Pichia pastoris empleando el
promotor constitutivo GAP, con el fin de reducir el uso de metanol durante su producción, y
continuar trabajando en el desarrollo de una la terapia de reemplazo enzimático como una
alternativa al tratamiento para las enfermedades de Tay-Sachs y Sandhoff. Se evaluaron diferentes
condiciones de cultivo a escala de 100 mL y escala de biorreactor, encontrando que el promotor
AOX1 resulta más eficiente para la producción de la enzima. | spa |
