Expresión transiente de la enzima Amilasa de Thermus sp. en Escherichia coli recombinante

Abstract

Este trabajo evaluó la expresión transiente de la enzima - Amilasa de Thermus sp, en Escherichia coli. Las tres cepas suministradas fueron: Escherichia coli JM109, Escherichia coli JM109/pGEM las cuales fueron empleadas como controles y Escherichia coli JM109/pGEM/ - Amy, cepa recombinante transformada por inserción del gen que codifica para la expresión de – Amilasa de Thermus sp. Para la evaluación de la expresión enzimática, se realizaron pruebas en medio Luria Bertani (LB) suplementadas con Glucosa al 1% p/v para las cepas control y pruebas con adición de ampicilina para la cepa de interés mediante fermentación discontinua en Erlenmeyer. De igual manera se incluyó una fermentación en la cual se indujo la expresión enzimática mediante la utilización del inductor IPTG para la Cepa 3. Al evaluar cuantitativamente la actividad Amilolítica de la cepa recombinante, se evidenció la expresión transiente de la - Amilasa en el medio LB con Ampicilina (50 g/mL) reportando su mayor actividad extracelular a la hora 18 de fermentación con 231 UA/minL y a nivel intracelular se presentaron valores de 25,29 UA/minL poco significantes. En el medio LB ampicilina suplementado con 0.5 g/mL de IPTG se alcanzó la máxima actividad amilolítica de 293 UA/minL intracelularmente y 224 UA/minL extracelularmente. Se realizaron pruebas de estabilidad térmica y de pH para la cepa recombinante determinando que el pH óptimo de la enzima es de 6 a 7 a rangos de temperatura entre 60 y 70ºC confirmando que las características de la enzima termofílica se mantienen al efectuar la producción de un microorganismo recombinante mesófilo.