Producción de Fructosiltransferasa recombinante de Aspergillus oryzae en Pichia pastoris y Escherichia coli

Abstract

Los fructooligosacáridos (FOS) son los prebióticos más empleados en la actualidad y su producción empleando fructosiltransferasas (FTasa) derivadas de plantas, hongos y bacterias ha sido ampliamente reportada. De igual forma, la expresión heteróloga de FTasa de Aspergillus sp. en sistemas de expresión fácilmente manipulables ha surgido como una alternativa para la producción eficiente de dicha enzima. En este trabajo, se evaluó en diferentes sistemas de expresión la producción de la FTasa recombinante de Aspergillus oryzae N74. Los sistemas de expresión empleados fueron Pichia pastoris GS115 y Escherichia coli BL21(DE3). En P. pastoris GS115 se emplearon los vectores pPIC9-FTasa y pPIC9K-FTasa, mientras que en E. coli BL21(DE3) se empleó el vector pPET21B-FTasa. El mejor sistema de expresión fue seleccionado para evaluar la producción de la enzima a escala de 1,7 L. A escala de 100 mL los mayores valores de actividad de FTasa se observaron en Pichia pastoris GS115 transformada con pPIC9K-FTasa, logrando valores de 73.4 U/mL, lo cual fue significativamente más alto que lo obtenido en Pichia pastoris GS115 pPIC9-FTasa o en E. coli BL21(DE3). El clon 2 de Pichia pastoris GS115 pPIC9K-FTasa fue evaluado a escala de 1,7 L logrando una actividad máxima de entre 350 y 380 U/mL. En conclusión, se establece que el uso de Pichia pastoris GS115 con el plásmido pPIC9K puede ser una alternativa para la producción heteróloga a nivel industrial de la enzima fructosiltransferasa de Aspergillus oryzae N74.